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根据背景知识的介绍可知,miR-182不太可能直接靶向所有这些基因,因为它们中的大多数不含有miR-182种子区域。 因此作者假设miR-182直接靶向某些基因,这些基因在破骨细胞生成过程中反过来特异性地调节IFN应答基因。 因此,作者分别对WT和miR-182功能丧失(Mir182ΔM/ΔM)的骨髓衍生的巨噬细胞、WT和miR-182功能获得(Mir182MTG)的骨髓衍生的巨噬细胞进行RNA-seq实验。获得了包含miR-182潜在靶标的24个基因列表。 然后,作者将这些基因与已发表的数据库重叠,该数据库通过实验验证了miR-182的1069个靶点,最终确定了4个miR-182直接靶点(PKR、ELOVL6、GPATCH2、JAZF1)。在这组基因中,编码双链RNA依赖性蛋白激酶(PKR)的基因Eif2ak2以最高表达水平脱颖而出,而其他三个基因仅略微表达。重要的是,在这四种基因中,只有PKR是在I型IFN途径中起关键作用的充分表征的因子,这也是作者的假设,即miR-182靶向PKR,进一步调节下游IFN通路(Fig4e)。34c和36c哪个身材好e)拟任职飞行员的资格、证书、等级和经历等信息,并填写在运行规范相关条款中。驾驶员航空经历需要足够详尽,以用于判断驾驶员在CCAR-135部运行中驾驶航空器的资格。担任航空器机长下一步,作者研究miR-182作为破骨细胞生成调节剂起作用的机制。首先分别对WT对照和Mir182ΔM/ΔM小鼠的基线破骨细胞前体和RANKL刺激后的破骨细胞RNAs(RNA-seq)做了高通量测序来进行基因表达延伸,以鉴定在破骨细胞生成期间由miR-182调节的基因。结果表明miR-182的缺乏显着抑制破骨细胞生成调节因子(例如NFATc1和Prdm1)和破骨细胞标记基因(例如TRAP,组织蛋白酶K,OCSTAMP、DCSTAMP和Atp6v0d2)的表达。GO分析和GSEA分析提示IFN途径与miR-182缺失的关系。作者又查阅了先前的文献证明干扰素途径(IFNα,β或γ)抑制破骨细胞分化。 RANKL在破骨细胞中诱导的内源性IFN-β是维持平衡分化状态的重要抑制反馈环。因此,作者认为Mir182ΔM/ΔM细胞中I型IFN应答基因组的高度显着富集反映了显着增强的IFN途径,并且可以通过这个来解释miR-182缺失抑制的破骨细胞生成的表型(Fig4a-d)。

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